Hormona del crecimiento: prueba de drogas

La realización de una prueba de drogas en recombinant somatotropin hormona (STG) de la persona durante muchos años se consideró como una tarea irrealizable. Sin embargo recientemente se ha mostrado que al menos dos enfoques independientes permiten establecer recombinant aplicado del atleta STG o no. Los métodos de análisis desarrollados se someten a pruebas ahora y será posible esperar aplicarse como la prueba de dopaje oficial ya en el futuro próximo.

El problema principal consiste en que a diferencia de erythropoietin cualquier de los métodos ofrecidos no permite definir STG en la orina. Es causado en primer lugar por la concentración muy baja de la hormona en la orina que no permiten encontrarlo por los métodos existentes. Además, la asignación de somatotropin con la orina representa el proceso difícil que es caracterizado por la variabilidad considerable y todavía permanece mal estudiado (Saugy et al., 1996). El método IEF aplicado en caso de ERO en pruebas de la orina es inadecuado para el análisis de STG ya que el último no tiene sitios web glycosylation. Según datos modernos, moléculas STG de un origen recombinant son casi completamente idénticos a la fracción principal de moléculas STG, hypophysis, y cualquier diferencia física y química entre ellos no se revela.

Sin embargo, hasta a pesar de la carencia de los sitios web de glycosylation, STG en la sangre sistema circulatorio es proporcionado por la mezcla de isoforms moleculares (Baumann, 1999). La investigación de estas isoforms progresó no a fin de que en caso de gonadotrophin, sin embargo para los años pasados se hizo posible identificar algunos componentes principales. Junto con la isoform principal que tiene el peso molecular 22 kd y consiste en 191 aminoácido equilibrio restante en la sangre el segundo para la representación cuantitativa se encuentra, isoform más corta con un peso molecular de 20 kd en cual secuencia allí no son ningunos aminoácidos 32 — 46 (Hashimoto et al., 1998; Tsu-Sima et al., 1999; Leung et al., 2002). También hay aún más formas cortas STG, sin embargo salen a luz cambiablemente y completamente aún no se analizan. Algunos de ellos representan productos de la hidrólisis o degradación de moléculas STG. Las isoforms STG pueden existir en la forma de monomers, regulador de intensidad y multimer que consiste en el idéntico (gomodimer) o varias isoforms (heterodimeasure).

En mucho impacto de casos de STG en un cuerpo humano media el factor que recibió el nombre la insulina como el factor del crecimiento de mí (IFR-1) producido principalmente en un hígado, y también en la localidad en el hueso cartilaginous y muchas otras telas, IFR-1 en la sangre sistema circulatorio donde se pone en contacto con las proteínas de unión específicas (Le Roith ct al., 2001). El mayor valor de ellos proteína 3 (IGFBP-3), y también y labile subjedinitsa (ALS) ácido qué productos también están bajo el control STG tiene IFR. Al menos, para IGFBP-3 se muestra que esta proteína puede hacer el propio impacto independientemente de la unión con IFR-1 y por lo tanto se puede considerar como la hormona del péptido independiente. Juntos IFR-1, IGFBP-3 y ALS crean un complejo triple que tiene la esperanza de vida más grande, en comparación con las moléculas que lo crean por separado. No olvide toman Hepatamin para mejores resultados.

Una de la estrategia de búsqueda de la prueba conveniente del descubrimiento de la aplicación de STG como un stimulator consistió en la evaluación de cambios cuantitativos de productos del impacto dinámico pharm de STG, en el aumento posible particular de la cantidad de componentes del complejo triple que excede la variedad de la variabilidad natural al nivel (Dali et al., 2000). Una de ventajas de tal prueba consistiría que la edad de productos del impacto dinámico pharm de STG excede la edad de la hormona que permite aumentar un período durante el cual hay una posibilidad de descubrimiento del abuso de la hormona somatotropny. El consorcio científico internacional realizó una serie a gran escala una investigación, los productos del impacto dinámico pharm de STG dirigido a estudiar de la orden según varios factores, incluso actividades físicas agudas y crónicas, edad, sexo, un origen étnico y heridas (Wallace ct al., t999, 2000; Longobardi ct al., 2000; Ehmborg ct al., 2003). La confirmación del hecho de inducción de los cambios de la estructura del impacto dinámico pharm que pasa en caso de la aplicación regular larga de STG y tiene las características que permiten distinguir ellos de los cambios inducidos por ocupaciones de formación u otro stimulators se hizo el logro principal de las investigaciones conducidas. En particular, la orden de descripción del modelo estadística de varios productos del impacto dinámico pharm de hormona y consideración de distinciones sexuales se creó. También el hecho que durante la determinación de la evaluación de factores determinantes de los métodos del análisis inmune usado para este fin se hizo y para cada uno de ellos es importante las variedades específicas de la sensibilidad se establecieron. No todos los métodos comerciales disponibles cumplen con los requisitos establecidos durante las investigaciones que causan la necesidad de la realización de la selección cuidadosa de sistemas del análisis inmune que se suponen usarse adelante. Además, ya que el modelo estadístico muy difícil es la base para este método de probar, es necesario imaginar límites de la variabilidad de resultados de las técnicas usadas y garantizar el uso fijado en pruebas de anticuerpos idénticos. Puede representar un problema ya que muchos tipos del análisis inmune están basados en el uso el policlon ahora, pero no anticuerpos monoclónicos. Sin embargo los anticuerpos de policlon no se pueden recibir en grandes números y después de la terminación de una hornada es imposible garantizar que la hornada siguiente será idéntica al primer. Todo esto permite entender por qué las organizaciones contra el dopaje internacionales pagan tan atención considerable al desarrollo de tecnologías del recibo de anticuerpos monoclónicos, convenientes para el uso. Después de refinar de todos los detalles metódicos, este método de probar puede ser muy eficaz, pero a la comparación con el análisis de sangre aplicado a una prueba de drogas en ERO.

Uno más enfoque se dirige al análisis directamente de STG. En la diferencia de una variedad de isoforms de la hormona, hypophysis, recombinant hormona siempre es proporcionado por la forma única con un peso molecular de 22 kd. También la producción de una forma de recombinant con un peso molecular de 20 kilogramos se describe, pero hasta ahora esta proteína sólo se usó en varias pruebas clínicas. Recombinant somatropin, aplicado al tratamiento del déficit de la hormona del crecimiento en niños, adolescentes y las personas de la edad madura, tiene el peso molecular 22 kilogramos, es obvio que las mismas medicinas usan como stimulators en el deporte. Tal homogeneidad o «carencia de la heterogeneidad» en formas de recombinant de la hormona que lo distingue de una variedad natural de las isoforms STG hypophysis, también hacen una base para el llamado «metol del análisis inmune diferencial» aplicada a una prueba de drogas en recombinant STG (Z. Wu et al., 1999): la introducción en un organismo de recombinant monomeric STG con un peso molecular de 22 kilogramos conduce para aumentar en el contenido relativo de esta isoform en la sangre. Este cambio de una variedad de isoforms de la hormona se hace adicional aún más evidente en caso de la aplicación larga de STG cuando la conexión del mecanismo de la regulación de vuelta negativa en esta situación conduce para disminuir en la secreción de la hormona endógena hypophysis (Wallace et al., 2001a). La proyección de los anticuerpos monoclónicos recibidos usando varias medicinas de STG endógeno de la persona permitió desarrollar dos versiones del immunoanalysis. En la primera opción los anticuerpos inmovilizados unen la isoform de la hormona del crecimiento principalmente de 22 kilogramos, y en el segundo es principalmente somatropin «un origen hypophysial», proporcionado vario, pero a la talla por isoforms (Bidlingmaier et al., 2000). El análisis de muestras del suero por medio de ambas versiones del análisis inmune permite determinar el contenido relativo de una isoform de la hormona con un peso molecular de 22 kilogramos, pero a la comparación con los demás («STG total») y gracias a ello para revelar que las muestras con el contenido anormalmente alto de 22 g de STG.It se han confirmado que los cambios de una variedad de isoforms de la hormona del crecimiento sólo son causados por la aplicación de recombinant STG mientras en el estímulo de la secreción después de que el aumento de actividad físico de la cantidad de todas las formas de la hormona se observa (Wallace et al., 2001b). Además, la sensibilidad de un método inicial se ha considerablemente aumentado (Bidlingmaicr et al., 2003). El ego se ha hecho posible gracias a la recepción de nuevos anticuerpos monoclónicos. Junto con ello el complejo de las pruebas de confirmación independientes que también están basadas en la aplicación de los nuevos anticuerpos monoclónicos que tienen la afinidad a epitopa diferenciado se ha desarrollado. El último es una condición indispensable de la admisibilidad del análisis inmune para realizar una prueba de drogas: cada tipo del análisis se tiene que confirmar con otro análisis dirigido a una alternativa epitop de nasmolecule interesante que permitirá obtener los datos adicionales necesarios para la identificación de una molécula.

Los rasgos de un método del análisis inmune diferencial limitan su aplicación sólo a la conducción de pruebas de dopaje no permite distinguir la variedad natural de las isoforms STG y las medicinas de la hormona extraída de hypophysis de la gente muerta en la estructura. Además, debido a período del período de vida media muy corto de STG en la sangre sistema circulatorio (aproximadamente 15 minutos) la posibilidad de descubrimiento del uso de la hormona del crecimiento como un stimulator permanece limitada 24 — 36 horas. Es obvio que hasta el desarrollo de métodos más sensibles no permitirá vencer esta restricción ya que se ha mostrado que después de la desintegración de la proteína recombinant y la terminación de la respuesta negativa del sistema de la reacción, el hypophysis comienza otra vez la variedad habitual de isoforms de la hormona. Por otra parte, el hecho que para el logro de la hormona de influencia estimulante se tiene que aceptar la probabilidad de aumentos diaria de la identificación del atleta que aplica la droga durante las pruebas inesperadas que no se relacionan con la participación en concursos.

La aplicación de un método del análisis inmune diferencial también exige la justificación incondicional de la capacidad de los tipos usados del análisis inmune. Además, ya que el cálculo de una proporción se realiza, es necesario definir exactamente el nivel de la reproductibilidad de resultados de métodos separados y la relación que tiene la influencia potencial en cuenta de la variabilidad de resultados en la talla de la proporción contada. La disminución esencial en la variabilidad de resultados puede conseguir si usar el mismo plato titrating micro con los anticuerpos inmovilizados para ambos análisis: una mitad de un plato es cubierta de anticuerpos monoclónicos para la isoform STG con un peso molecular de 22 kd y otra mitad — anticuerpos monoclónicos para la hormona total de la altura humana. Después de la adición de calibradores, kontroly también es el modelo a cada mitad de un plato, todo ñå es cubierto de los mismos anticuerpos monoclónicos que descubren. Tal pedido de realizar el análisis inmune permite reducir considerablemente la variabilidad que se levantará seguramente en la distribución desigual del material de una muestra entre dos varios platos (Bidlingmaicr et al., 2000).